Электронная библиотека Веда
Цели библиотеки
Скачать бесплатно
Доставка литературы
Доставка диссертаций
Размещение литературы
Контактные данные
Я ищу:
Библиотечный каталог российских и украинских диссертаций

Вы находитесь:
Диссертационные работы России
Медицинские науки
Гистология, цитология, эмбриология

Диссертационная работа:

Максимова Анна Владимировна. Растворимые формы мембранных белков клеток иммунной системы при бронхиальной астме у детей : Дис. ... канд. биол. наук : 14.00.36 Н. Новгород, 2006 161 с. РГБ ОД, 61:06-3/1254

смотреть содержание
смотреть введение
Содержание к работе:

ВВЕДЕНИЕ 4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9

  1. Иммунологические аспекты патогенеза бронхиальной астмы 9

  2. Иммунный ответ при цитомегаловирусной инфекции 13

  3. Иммунный ответ при микоплазменной инфекции 18

  4. Характеристика CD25 и CD95 активационных антигенов 23

  5. Характеристика CD5 О, CD54, CD38 белков адгезии 29

  6. Молекулы главного комплекса гистосовместимости -

HLAI класса и HLAII класса 37

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 43

  1. Исследуемые образцы и объем наблюдений 43

  2. Используемые моноклональные антитела 44

  3. Реакция непрямой иммунофлуоресценции 46

  4. Получение поликлональных антител, специфичных к поверхностным антигенам мононуклеарных клеток

крови человека 47

  1. Перйодатный метод синтеза конъюгата 47

  2. Иммуноферментные методы определения растворимых

форм мембранных белков клеток иммунной системы 48

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 51

3.1. Относительное содержание CD4+, CD8+, CD16+ лимфоцитов

в периферической крови у детей при астме 51

3.2. Сывороточный уровень растворимых антигенов CD25 и

CD95 у детей, больных бронхиальной астмой. 69

3.3. Сывороточное содержание растворимых белков адгезии

CD50, CD54, CD38 у детей при астме 84

3.4. Сывороточное содержание растворимых молекул
гистосовместимости I и II классов в периферической крови

детей с бронхиальной астмой 104

3.5. Взаимосвязь сывороточного уровня растворимых антигенов

ІСАМ и HLA с максимальной объемной скоростью выдоха 118

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 122

ВЫВОДЫ 131

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 132

ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АПК - антигенпрезентирующие клетки БА - бронхиальная астма ВИЧ - вирус иммунодефицита человека ДК - дендритные клетки ДП - дыхательные пути ИФА - иммуноферментный анализ МКА - моноклональные антитела МОС - максимальная объемная скорость выдоха РВИ - респираторная вирусная инфекция ЦМВ - цитомегаловирус ЦМВИ - цитомегаловирусная инфекция ЦТЛ - цитотоксические Т-лимфоциты HLA - система главного комплекса гистосовместимости FasL - Fas-лиганд

mICAM-1 - связанная с мембранной молекула ICAM-1
sAg - суперантиген
щ sCD25, sIL-2R - растворимая форма CD25 антигена

sCD38-растворимая форма CD38 антигена sCD95, sFas - растворимая форма CD95 антигена sHLA-DR - растворимая форма HLA-DR молекул

sHLA-I - растворимая форма молекул главного комплекса гистосовместимости I класса sICAM-1, sCD54 - растворимая форма CD54 антигена sICAM-3, sCD50 - растворимая форма CD50 антигена Th - Т-хелперы ТЫ - Т-хелперы первого типа Th2 - Т-хелперы второго типа

Введение к работе:

Бронхиальная астма служит классическим примером иммунопатологии и является частым хроническим заболеванием легких у детей. В течение последних десятилетий во всем мире отмечен рост ее распространенности, а также увеличение числа детей с тяжелыми формами заболевания. Среди школьников России частота астмы составляет 3-12% [37]. Многими специалистами признается потенцирующая роль респираторной вирусной и бактериальной инфекции в утяжелении бронхиальной астмы, развитии ее обострений [5, 6, 60]. В частности, это относится к таким патогенам как цитомегаловирус и Mycoplasma pneumoniae. Инфицированность микоплазмами детей с астмой составляет 66-88%, а смешанная, вирусно-микоплазменная инфекция отмечается у 40-42% больных детей. Инфекционные микроорганизмы часто персистируют в слизистой оболочке дыхательных путей и могут влиять на функциональное состояние иммунной системы больных бронхиальной астмой [14,30,44].

Широкая распространенность бронхиальной астмы обусловливает актуальность детального исследования молекулярных механизмов иммунного ответа при различных формах данного заболевания у детей. Это относится и к изучению роли растворимых форм мембранных белков клеток иммунной системы в патогенезе астмы.

Мембранные белки клеток иммунной системы играют важную роль в активации, регуляции, кооперации этих клеток и реализации иммунного ответа в целом. Известно, что мембранные протеины могут иметь растворимые изоформы, образующиеся за счет шеддинга или альтернативного сплайсинга матричной РНК. Получены данные о том, что они могут выполнять функции ограничителей иммунных реакций или же выступать в роли активаторов иммунологических процессов [40, 81,138].

Оценка сывороточного уровня отдельных антигенов и иммунофенотипирование мононуклеарных клеток крови могут быть полезны как в теоретическом аспекте для определения их роли в патогенезе различных

5 заболеваний (в том числе и бронхиальной астмы), так и в практической медицине для мониторинговых и прогностических целей.

Цель исследования

Изучить характер изменения сывороточного уровня растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы во взаимосвязи с популяционным составом мононуклеарных клеток крови детей, больных бронхиальной астмой.

Задачи

  1. Исследовать относительное содержание клеток периферической крови, несущих на своей поверхностной мембране гликопротеины CD4, CD8 и CD 16 у детей, больных бронхиальной астмой.

  2. Определить сывороточное содержание растворимых CD25, CD95, CD38, CD50, CD54, HLA-I, HLA-DR антигенов и относительное содержание положительных по этим антигенам мононуклеарных клеток периферической крови у детей, больных астмой разной степени тяжести.

  3. Определить уровень вышеприведенных растворимых антигенов сыворотки крови и популяционный состав мононуклеарных клеток в периоды. обострения и ремиссии астмы.

  4. Оценить характер изменения сывороточного содержания растворимых форм CD25, CD95, CD38, CD50, CD54, HLA-I, HLA-DR антигенов и CD25+, CD95+, CD38+, CD50+, CD54+, HLA-I+, HLA-DR+ мононуклеарных клеток крови при бронхиальной астме, ассоциированной с инфицированием цитомегаловирусом и/или Mycoplasma pneumoniae.

  5. Исследовать возможность существования корреляционных взаимоотношений между сывороточным уровнем тестированных растворимых антигенов, популяционным составом мононуклеарных клеток крови и проходимостью бронхов у детей.

Научная новизна

Показано, что развитие бронхиальной астмы у детей сопровождается изменением сывороточного содержания растворимых форм ряда мембранных антигенов клеток иммунной системы. Сывороточный уровень антигенов адгезии sCD50 и sCD54, а также содержание растворимых форм

активационных антигенов CD25, HLA-DR и опосредующего апоптоз белка sCD95, повышается по мере нарастания степени тяжести заболевания, что свидетельствует об их возможном участии в патогенетических механизмах формирования иммунных реакций у детей при бронхиальной астме. У детей при различных вариантах течения бронхиальной астмы выявлены изменения иммунофенотипа мононуклеарных клеток периферической крови, несущих на своей поверхностной мембране рецепторы CD25, CD38, CD50, CD54 и HLA-DR.

Впервые продемонстрировано влияние возбудителей оппортунистических инфекций (цитомегаловируса и Mycoplasma pneumoniae) на уровень растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы у детей с астмой. Отмечено, что как моноинфицирование цитомегаловирусом (ЦМВ) или микоплазмой, так и микст-инфицирование (ЦМВ+микоплазма) сопровождаются повышением сывороточного содержания антигенов sCD25 и sHLA-DR. У микст-инфицированных детей, больных бронхиальной астмой обнаружен также рост сывороточного уровня растворимых антигенов адгезии CD50, CD54 и снижение уровня sCD38 антигена. Выявлено, что і моноинфицирование цитомегаловирусом ассоциировано у больных детей с уменьшением уровня антигена sCD50 и понижением относительного количества CD54+, HLA-DR+ и HLA-I+ мононуклеарных клеток крови, определяемых в реакции иммунофлуоресценции. Сравнительное сопоставление показало, что микст-инфицирование сопровождается наиболее выраженными изменениями уровня тестированных антигенов. Эти изменения отражают вариабельность иммунологических реакций организма в зависимости от вида инфицирования.

Практическая значимость

Содержание растворимых ICAM-1 и HLA-DR антигенов в сыворотке крови может быть использовано в качестве дополнительных показателей тяжести бронхиальной астмы и выраженности бронхообструкции, и рассматриваться как возможный мониторинговый показатель неблагоприятного течения астмы у детей.

Увеличение сывороточной концентрации растворимой формы антигена

7 адгезии ІСАМ-1 у детей при бронхиальной астме взаимосвязано со снижением проходимости средних бронхов (величиной коэффициента МОС50). Увеличение уровня HLA-DR-положительных клеток и' растворимых HLA-DR антигенов ассоциировано с усилением обструкции мелких и средних бронхов (параметры МОС75 и МОС50), соответственно.

Определение уровня растворимых форм CD25, CD95, CD54, HLA-DR антигенов клеток иммунной системы может применяться для прогнозирования тяжести течения бронхиальной астмы у детей (в том числе и ассоциированной с инфицированием цитомегаловирусом и микоплазмой) в аллергологических и пульмонологических педиатрических службах.

Полученные сведения применяются в работе врачами аллергологического центра детской городской клинической больницы №27 «Айболит», а также используются в курсе лекций по иммунологии для студентов биологического факультета ННГУ им. Н.И. Лобачевского.

Положения, выносимые на защиту

  1. Бронхиальная астма у детей сопровождается изменением сывороточного содержания растворимых форм мембранных антигенов клеток s иммунной системы, относящихся к различным функциональным группам белков.

  2. Инфицированность больных бронхиальной астмой детей цитомегаловирусом и/или Mycoplasma pneumoniae ассоциирована с модуляцией уровня растворимых форм мембранных антигенов.

  3. Содержание в крови растворимых форм антигенов CD54 и HLA-DR, а также HLA-DR-положительных мононуклеарных клеток отрицательно коррелирует с проходимостью бронхов у детей, больных бронхиальной астмой.

Апробация работы

Результаты работы представлены на Международной научно-практической школе-конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет», (Санкт-Петербург, 2002); VII и IX Нижегородской сессии молодых ученых (Н. Новгород, 2002, 2004); Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов, 2004»; Научной конференции, посвященной 75-

8 летию Нижегородского НИИЭМ «Новые технологии в профилактике, диагностике, эпиднадзоре и лечении инфекционных заболеваний», (Н. Новгород, 2004); 3-м российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии», (Москва, 2004); Молодежной школе-конференции «Актуальные аспекты современной микробиологии», 2005; 15-ом Национальном конгрессе по болезням органов дыхания и 1-м Учредительном конгрессе Евроазиатского респираторного общества, (Москва, 2005).

Диссертация была апробирована 2 марта 2005 года на совместном расширенном заседании кафедры молекулярной биологии и иммунологии Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского, Нижегородского отделения Российского научного общества иммунологов, Нижегородского отделения Российского научного общества биохимиков и молекулярных биологов.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Структура и объем диссертации к

Диссертационная работа в объеме 155 страниц состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 16 рисунками и 23 таблицами. Библиографический указатель включает 340 источников литературы (79 отечественных и 261 иностранных авторов).

Подобные работы
Керашева Светлана Нурбиевна
Алгоритмы исследования системы нейтрофильных гранулоцитов у детей с бронхиальной астмой
Рамазанова Зарема Керимовна
Состояние иммунной системы, интерфероногенез и продукция цитокинов у часто болеющих детей и детей с бронхиальной астмой в разные периоды заболевания
Нестерова Алена Валерьевна
Клинико-иммунологические особенности аллергических ринитов при сочетании с атопической бронхиальной астмой у детей [Электронный ресурс]
Андреянова Александра Николаевна
Роль гистамина, гистаминовых рецепторов в регуляции синтеза IgE при тяжелой гормонозависимой бронхиальной астме у детей
Лукачев Игорь Викторович
Специфический IgG-, IgE-ответ и течение бронхиальной астмы у детей в процессе вакцинации препаратами "Pneumo 23" и "Act-Hib"
Петушкова Татьяна Анатольевна
Клинико-иммунологические особенности у детей, страдающих бронхиальной астмой, ассоциированной с хламидийной инфекцией
Матяш Ольга Валентиновна
Секреторный иммунитет у детей с бронхиальной астмой в зависимости от степени тяжести и периода заболевания
Сапожников Александр Михайлович
Функции белков теплового шока в популяциях лимфоидных клеток
Мурашко Дмитрий Александрович
Адреналинзависимая регуляция экспрессии белков теплового шока 70 кДа в лимфоидных клетках [Электронный ресурс]
Гусарова Галина Алексеевна
Экзоцитоз и транслокация на клеточную поверхность белков теплового шока 70 КДА в популяциях лимфоидных клеток

© Научная электронная библиотека «Веда», 2003-2013.
info@lib.ua-ru.net