Электронная библиотека Веда
Цели библиотеки
Скачать бесплатно
Доставка литературы
Доставка диссертаций
Размещение литературы
Контактные данные
Я ищу:
Библиотечный каталог российских и украинских диссертаций

Вы находитесь:
Диссертационные работы России
Медицинские науки
Медицинская биохимия

Диссертационная работа:

Криворучко Александр Борисович. Совершенствование методов контроля качества микробиологической диагностики инфекций, передаваемых преимущественно половым путем : диссертация ... кандидата медицинских наук : 14.00.46 / Криворучко Александр Борисович; [Место защиты: ГОУВПО "Военно-медицинская академия"].- Санкт-Петербург, 2008.- 206 с.: ил.

смотреть содержание
смотреть введение
Содержание к работе:

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 2

ОГЛАВЛЕНИЕ 3

ВВЕДЕНИЕ 6

Глава 1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12

1.1. Актуальность системы обеспечения качества лабораторных исследований 12

1.2. Основные этапы лабораторного анализа и сопряженные с ними проблемы 14

1.3. Примеры циклов проведения ВОК микробиологических исследований 16

1.4. Способы контроля качества количественных методов лабораторной диагностики 21

1.5. Проблемы стандартизации и унификации исследований 22

1.6. Автоматизация субъективных исследований 25

1.7. Качество в микробиологии и инфекционной иммунологии 28

1.8. Современное состояние проблемы качества диагностики урогенитальных инфекций 32

1.9 Микробиологическая диагностика инфекций, передаваемых преимущественно половым путем 36

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 51

2.1. Общая характеристика пациентов 51

2.1.1. Пациенты с урогенитальными инфекциями 51

2.1.2. Пациенты с установленным диагнозом сифилис 55

2.2. Методы отбора биологического материала 61

2.3. Методы хранения и транспортировки биологического материала 64

2.4. Методы микробиологической диагностики 66

2.4.1. Методы диагностики трихомониаза 66

2.4.1.1. Методы микроскопической диагностики 66

2.4.1.2. Культуральный метод диагностики 71

2.4.1.3. Диагностика методом ПЦР 72

2.4.2. Методы диагностики микоплазмоза 72

2.4.3. Методы серологической диагностики сифилиса 75

2.5. Методы статистической обработки результатов исследований 82

Глава 3. МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ПРОЦЕДУРЕ КОН ТРОЛЯ КАЧЕСТВА МЕТОДОВ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГ НОСТИКИ. ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕДУРЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА МИКРОСКОПИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ТРИХОМОНИАЗА 83

3.1 Понятие об иерархичности методов диагностики ИПППП 83

3.2 Обоснование принципиальной схемы процедуры контроля качества 84

3.3 Обоснование общей структуры исследования 94

3.4. Результаты микроскопической диагностики трихомониаза 96

3.5. Подходы к стандартизации микроскопической диагностики 138

3.6. Обоснование микроскопической диагностики с использованием систем цифровой обработки изображений 140

3.7. Подготовка контрольных материалов для оценки качества микроскопической диагностики трихомониаза 140

Глава 4. ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕДУРЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ МИКОПЛАЗМОЗА 151

4.1. Результаты культуральной диагностики с использованием различных питательных сред 151

4.2. Данные исследований по культуральной диагностике урогениталь-ного микоплазмоза 151

4.3. Результаты контроля питательных сред Liophilm 159

Глава 5. ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕДУРЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА СЕ РОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА 160

5.1. Результаты изучения специфического гуморального иммунитета при сифилисе 160

5.2. Оценка тест-систем существующих на рынке 161

5.3. Обоснование схемы контроля качества скрининговых тест-систем... 162

5.4. Разработка контрольной панели сывороток 164

5.5. Оценка эффективности скринингового агглютинационного метода серологической диагностики сифилиса на примере ТРРА 168

5.6. Результаты испытания иммуноблоттинга 170

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 180

ВЫВОДЫ 190

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 191

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 192

ПРИЛОЖЕНИЕ 216 

Введение к работе:

Актуальность проблемы. Интерес к методам этиологической лабораторной диагностики инфекций, передаваемых преимущественно половым путем (ИШТПП), в последние годы неуклонно возрастает. Это связано с широким распространением, ростом заболеваемости, а также с социальным и экономическим ущербом, которые всегда сопутствуют данной группе инфекционной патологии (Савичева A.M., 2004; Дмитриев Г.А., 2005; Иванов A.M., 2005; Borisenko К.К. et al., 1999; Majeroni B.A., 2007).

Микробиологическая диагностика ИПППП вышедшая в последнее десятилетие на качественно более высокий уровень, позволила перенести основную массу исследований из специализированных научно-исследовательских центров в лаборатории практического здравоохранения (Никулин Н.К., 1999; Аковбян В.А. и др., 2007). Вместе с тем, сложилась парадоксальная ситуация: с одной стороны появились перспективные, доступные и воспроизводимые методы, позволяющие подтвердить этиологию заболевания, с другой - возникли трудности с регламентацией проведения исследований и отсутствием способов управления процессом лабораторной диагностики путем выявления и предотвращения возможных ошибок (Меньшиков В.В., 2003; Рищук СВ., Костючек Д.Ф., 2005; Хоровская Л.А., 2007).

В дерматовенерологической службе России в силу разноплановости методологических подходов, разнообразия проводимых исследований, различного уровня квалификации исследователей, отсутствия необходимого контроля на разных стадиях процесса анализа высока вероятность получения недостоверных результатов, что негативно отражается на выборе средств и схем лечения ИПППП (Бойцов А.Г. и др., 2000).

При выборе метода этиологической диагностики урогенитальной инфекции, оптимального для применения в условиях конкретной диагностической лаборатории на первый план выдвигаются проблемы технического и экономического характера, а вопросы организации контроля качества, как правило, считаются второстепенными (Васильев М.М., 1998; Дмитриев Г.А., 2003).

Однако в настоящее время систематическая оценка качества выполняемых ла бораторных исследований признана неотъемлемой составляющей диагностического процесса (Приказ МЗ РФ №45, 2000; Назаренко Г.И., Кишкун А.А, 2001; Мош-кин А.В., Долгов В.В., 2004, Manual of Clinical Microbiology, 7 ed., 1999). Для большинства методов, используемых в лабораторной диагностике, требования к аналитическому качеству регламентированы руководящими документами (Гаранина Е.Н., 1997; Заикин Е.В. и др., 2000; Карпищенко А.И., Грашин Р.А., 2001; Кишкун А.А., 2004).

Несмотря на то, что лаборатории принадлежит одна из ведущих ролей в установлении диагноза ИІТШІП, обеспечение качества исследований, подразумевающее широкий спектр процедур, начиная с контроля качества оборудования и реагентов, ведения внутрилабораторного контроля и заканчивая проверкой клинической значимости результатов анализов на сегодняшний день, не осуществляется в полном объеме (Кудрявцева М.Б., 2000; Дмитриев Г.А., 2005).

В условиях сохранения неблагоприятной эпидемиологической обстановки по заболеваемости И1И11Д1 в Российской Федерации приоритетной задачей является проведение качественной диагностики этих заболеваний, что подразумевает разработку стандартизованной системы контроля качества работы лабораторий, занимающихся диагностикой ИІТШІП (Фриго Н.В. и др., 2004).

Существующая на данный момент система мониторинга качества диагностики урогенитальных инфекций предполагает обязательное участие КДЛ в программах федеральной системе внешней оценки качества ФСВОК, а также проведение внутрилабораторного контроля (Залесских Н.В., и др., 2004). Оценка качества диагностики ИПППП микроскопическим и серологическим методами осуществляется путем применения набора контрольных образцов - панельного тестирования.

В качестве контрольных образцов для оценки микроскопического метода диагностики ИПППП используются наборы микрофотографий, просматривая которые микроскопист должен сделать вывод о наличии или отсутствии в них возбудителя инфекции. Результаты данной диагностики сравниваются с заключением экспертной группы (Малахов В.Н., и др., 2002). Существующие на данный момент контрольные образцы, по мнению многих авторов, обладают рядом недостатков (Зу рочка А.В., Чукичев А.В., 2000; Егорова О.В., 2004). Коллекции не включают все описанные морфологические формы возбудителей, не используются все методики окраски, применяющиеся на практике. Также недостатком является возможность контроля только метода микроскопии в проходящем свете. Отсутствует алгоритм позволяющий использовать новую микроскопическую технику, обладающую дополнительными средствами визуализации изображения, в качестве средства для улучшения и контроля качества микроскопической диагностики ИІ1ШШ (Колупаев В.Е., 2000).

Контроль качества серологических методов диагностики ИПППП осуществляется посредством использования наборов (панелей) сывороток. В настоящее время отсутствуют официально утвержденные панели сывороток для контроля диагностики урогенитальных инфекций. Имеющиеся наборы представляют высокотит-ражные сыворотки с неизвестными критериями подбора, которые не охарактеризованы по наличию антител к наиболее иммуногенным антигенам возбудителя (Фри-го Н.В., и др., 2004).

Для контроля бактериологических методов диагностики урогенитальных инфекций метод панельного тестирования не применяется. Основными задачами системы мониторинга качества в этом случае является оценка качества питательных сред, и совершенствование интерпретации полученных исследований. Наименее отработаны данные принципы в культуральной диагностике условно-патогенных ИПППП требующих полуколичественного учета (Дмитриев Г.А., 2005). Поэтому требуется создание и внедрение в практику правил внутрилабораторного контроля качества бактериологических методов, предполагающих определение количества возбудителя в исследуемой пробе.

В этой связи возникает настоятельная необходимость совершенствования и внедрения в практику методов контроля качества ИПППП.

Все вышеизложенное и предопределило цель и задачи настоящего диссертационного исследования.

Цель работы: усовершенствовать методы контроля качества микробиологической диагностики инфекций, передаваемых преимущественно половым путем.

Задачи исследования.

1. Оценить состояние контроля качества внутрилабораторного этапа микробиологической диагностики ИППГШ в современных условиях.

2. Оценить возможности стандартизации микроскопической диагностики урогенитального трихомониаза и обосновать основные требования к контролю качества.

3. Определить возможные источники ошибок при проведении культуральной диагностики урогенитального микоплазмоза и обосновать методические подходы к повышению эффективности контроля качества при выявлении Mycoplasma hominis.

4. На примере сифилиса обосновать методы контроля качества серологической диагностики И11111111.

5. Обосновать алгоритмы проведения внутрилабораторного контроля качества микробиологической диагностики ИПППП.

Научная новизна исследования.

Показаны преимущества микроскопической диагностики трихомониаза с помощью принципиально новых оптических приборов - микровизоров, основанных на получении цифрового микроизображения. Впервые предложена серия микропрепаратов, с помощью которых возможно проведение контроля качества микроскопической диагностики трихомониаза с учетом всех, используемых на практике методов, наиболее значимых биологических материалов и атипичных морфологических вариантов возбудителя.

Продемонстрирована взаимосвязь между данными культуральной диагностики урогенитального микоплазмоза при использовании жидких и плотных питательных сред. Обоснована процедура внутрилабораторной оценки диагностической эффективности питательных сред, повышающая точность выявления этиологически значимых концентраций возбудителя.

На примере сифилиса показано, что разработке панелей сывороток, для контроля серологической диагностики, должны предшествовать исследования особенностей образования и динамики специфических антител. Установлено, что контрольные материалы должны быть охарактеризованы по содержанию антител ко всему спектру видоспецифичных микробных антигенов.

Практическая значимость.

Обоснованы предложения по разработке контрольных материалов и к самой процедуре оценки качества микробиологической диагностики ИПППП.

Систематизированы и предложены комплексы организационных мер в виде алгоритмов, позволяющих выявлять диагностические ошибки, и проводить целенаправленные действия, сводящие их возникновение к минимуму.

Разработанные контрольные материалы, в том числе, для оценки микроскопической и серологической диагностики, могут использоваться в условиях практических лабораторий.

Личное участие автора в получении результатов. Автором научно обоснована методология исследования, проанализированы результаты микроскопических, культуральных и серологических тестов, разработаны контрольные материалы для оценки качества микробиологической диагностики ИПППП, создан алгоритм поиска и устранения внутрилабораторных причин дефектов лабораторной диагностики ИПППП.

Автор лично планировал исследования, принимал непосредственное участие в микробиологическом обследовании больных, организовывал и участвовал в проведении всех видов анализа, а также осуществлял контроль качества методов диагностики. Автором лично формировалась база данных, проводилась их статистическая обработка и обобщение полученных результатов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Применение стандартных, всесторонне охарактеризованных контрольных материалов - важное условие эффективной и достоверной микробиологической диагностики ИПППП.

2. Разработанные материалы для контроля качества микроскопического, куль-турального и серологического методов позволяют повысить эффективность и достоверность диагностики ИПППП.

Реализация и внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в научную, учебную и лечебно-диагностическую работу кафедры и кли ники кожных и венерических болезней, кафедры микробиологии, научно-исследовательского отдела передовых медико-биологических технологий ВМедА им. СМ. Кирова, СПб ГУЗ «КВД №4» и ГУЗ «Областного КВД» (С.-Петербург).

Апробация и публикация материалов исследования. Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях Санкт-Петербургского общества дерматовенерологов им. В.М. Тарновского (С.-Петербург, 2006, 2008) и Санкт-Петербургского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им И.И. Мечникова (С.-Петербург, 2007); 40-й научно-практической конференции дерматовенерологов и врачей смежных специальностей Санкт-Петербурга «Актуальные проблемы дерматовенерологии. Контроль и профилактика инфекций, передающихся половым путем» (С.Петербург, 2005); научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии» (С.-Петербург, 2006); социальном форуме «Югра — территория здоровья» (Ханты-Мансийск, 2007); 2-ой Российской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты» (Сочи, 2007); 1-ой Национальной конференции с международным участием «Нейроинфекции» (Москва, 2007); XI Всероссийском научном форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (С.-Петербург, 2007); V Европейском конгрессе по протистологии и XI Европейской конференции по биологии беспозвоночных (С.-Петербург, 2007); научно-практической конференции «Актуальные вопросы этиологической диагностики инфекционных заболеваний» (Екатеринбург, 2008).

По материалам исследования опубликовано 27 печатных работ, из которых 9 в реферируемых журналах.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 226 страницах компьютерного набора, состоит из введения, 5 глав (обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований), заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения и указателя литературы, включающего 258 источников, в том числе 167 отечественных и 91 зарубежных. Текст содержит 42 таблицы и 14 рисунков.

Подобные работы
Липова Елена Валерьевна
Урогенитальные инфекции женщин: методологические, клинико-лабораторные подходы к диагностике и терапии
Ширшова Екатерина Владимировна
Дифференциальная диагностика уретрита, обусловленного инфекциями, передаваемыми половым путем, с помощью современных методов амплификации нуклеиновых кислот
Шайхутдинов Рафик Габдулхаевич
Диагностика и терапевтическая коррекция специфических изменений предстательной железы при некоторых инфекциях, передаваемых половым путем
Сыресин, Василий Аркадьевич
Урогенитальные инфекции, передаваемые половым путем в условиях пенитенциарной системы (клинические, социально-эпидемиологические характеристики, оптимальные методы диагностики и лечения)
Марданов Адиль Зиннурович
Улучшение результатов челюстно-лицевых операций у детей путем совершенствования методов общей анестезии
Савельев Павел Анатольевич
Совершенствование химических методов отбеливания пигментированных витальных зубов путем повышения резистентности эмали и дентина
Устинникова Ольга Борисовна
Стандартизация и валидация методов ракетного иммуноэлектрофореза и иммуноферментного анализа при контроле качества медицинских биологических препаратов
Алиева Ольга Дмитриевна
Применение магнитно-резонансной томографии для диагностики распространенности рака молочной железы и контроля за качеством лечения метастазов [Электронный ресурс]
Киргуева Мадина Петровна
Организация эпидемиологического надзора второго поколения за инфекциями, передающимися преимущественно половым путем, и ВИЧ-инфекцией среди пациентов лечебно-профилактических учреждений г. Краснодара
Беликов Александр Николаевич
разработка и научное обоснование основных направлений по снижению инфекций, передаваемых половым путем на региональном уровне (на примере Калужской обл.) [Электронный ресурс]

© Научная электронная библиотека «Веда», 2003-2013.
info@lib.ua-ru.net