Электронная библиотека Веда
Цели библиотеки
Скачать бесплатно
Доставка литературы
Доставка диссертаций
Размещение литературы
Контактные данные
Я ищу:
Библиотечный каталог российских и украинских диссертаций

Вы находитесь:
Диссертационные работы России
Медицинские науки
Клиническая медицина

Диссертационная работа:

Москвитина Ольга Викторовна. Клинико-диагностическое значение определения антител к глутатионпероксидазе у больных системной склеродермией с использованием иммобилизированной гранулированной формы фермента : диссертация ... кандидата медицинских наук : 14.00.39 / Москвитина Ольга Викторовна; [Место защиты: ГОУВПО "Волгоградский государственный медицинский университет"].- Волгоград, 2009.- 138 с.: ил.

смотреть содержание
смотреть введение
Содержание к работе:
ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1. Современные аспекты иммунопатогенеза системной склеродермии, роль активных форм кислорода и антиоксидантной системы
1.1 Физиологическая и патофизиологическая роль активных форм кислорода
1.2 Глутатионпероксидаза, её структура и функции
1.3 Современные представления об иммунопатогенезе системной склеродермии, роль активных форм кислорода и антиоксидантной системы ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. Клиническая характеристика обследованных больных и здоровых лиц
2.1. Больные системной склеродермией
2.2. Здоровые лица
ГЛАВА 3. Материалы и методы
3.1. Получение образцов исследуемого материала
3.2. Иммунологические методы исследования
3.2.1. Характеристика антигена
3.2.2. Иммобилизация фермента
3.2.3. Определение антител к глутатионпероксидазе иммуноферментным методом с использованием гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами
3.3. Определение активности глутатионпероксидазы
3.4. Общеклинические и иммунологические методы исследования
3.5. Статистическая обработка полученных результатов
ГЛАВА 4. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у здоровых лиц
ГЛАВА 5. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией
5.1. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией с различной степенью активности заболевания
5.2. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией с различным характером течения заболевания
5.3. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией с различной стадией заболевания
5.4. Активность глутатионпероксидазы и уровень антител к ней у больных системной склеродермией с различными клиническими проявлениями
5.5. Влияние терапии на активность глутатионпероксидазы и антител к ней у больных системной склеродермией
ГЛАВА 6. Диагностическое значение активности глутатионпероксидазы и антител к ней при системной склеродермии
ГЛАВА 7. Обсуждение результатов
ВЫВОДЫ ПО
Введение к работе:

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ Системная склеродермия (ССД) является полисиндромным воспалительным заболеванием, клинические проявления которого варьируют в диапазоне от мягко протекающего недуга с преимущественным поражением кожи, опорнодвигательного аппарата и сосудистой патологии по типу облитерирующей микроангиопатии до тяжелого инвалидизирующего поражения с развитием полиорганной недостаточности [17,23,25,26,81].

ССД является относительно редкой патологией с первичной заболеваемостью 2,7 — 12 случаев на 1 000 000 населения в год, тем не менее, трудно переоценить ее социально-экономическое значение.

Преимущественное поражение лиц трудоспособного периода жизни, высокий процент инвалидизации обуславливают большие экономические потери, включающие высокую стоимость диагностики и лечения, выключение больных из сферы производства, затраты на социальное обеспечение работающих пациентов и инвалидов [32,33,45,69,84,196,218].

За последние десятилетия произошел значительный прогресс в представлениях о ССД: исследованы патогенетические механизмы, детально изучены клиника и эволюция заболевания, разработаны основы диагностики и классификация, создана программа патогенетической терапии с дифференцированным использованием антифиброзных, иммуномодулирующих и сосудистых средств [23,24,26,71,81,141,174,237].

Несмотря на достигнутые успехи, прогноз при системной склеродермии остается зачастую неблагоприятным: согласно статистике,
40% больных с острым и подострым течением погибает в течение первых 5 лет заболевания, 70% — в течение 10 лет [3,25,51,196]. Исходя из этого, актуальными задачами для клиницистов являются своевременная постановка диагноза, назначение адекватной терапии и объективная оценка ее эффективности. Только выполнение всех трех задач дают возможность модифицировать болезнь и повлиять на ее исход.

В числе основных задач, инициированных в 2000-2010 гг. под эгидой ВОЗ Всемирной декады по заболеваниям, поражающим двигательный аппарат человека (Bone and jont decade), были названы дальнейшее изучение патогенетических механизмов ревматических заболеваний, совершенствование и внедрение в практику новых методов ранней диагностики и лечения с учетом не только клинической, но и экономической эффективности и целесообразности [69,84].

Как показали новейшие разработки в иммунодиагностике ревматических заболеваний, иммуноферментные методы анализа (ИФА) с использованием магнитоуправляемых сорбентов на основе антигенов нуклеиновой, липидной и белковой природы в полной мере отвечают указанным требованиям. Неоспоримые преимущества метода заключаются, в первую очередь, в повышении стабильности иммобилизированного биополимера, что делает его устойчивым к различным химическим и физическим воздействиям. Помимо этого, иммобилизация биологически активных веществ в поверхностном слое гранулы создает высокую концентрацию антигена именно в реакционноактивной зоне, тем самым повышая чувствительность твердофазных методов анализа. Включение магнитного материала в гранулы дает возможность ускорить и упростить манипуляции на всех этапах исследования, улучшая качественные характеристики определений и увеличивая число обрабатываемых проб. И, наконец, повторное использование сорбента после регенерации ведет к значительному экономическому эффекту [21,31,39].

Гранулированные препараты с магнитными свойствами уже были использованы для усовершенствования иммунодиагностики ССД и выявления антител к кардиолипину, каталазе, фибронектину и другим биополимерам. Как показали исследования, преимущества метода ИФА с применением иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов (ИГАП) делают его не только экономичным и легко применимым в практической медицине, но и позволяют решить вопросы ранней диагностики ревматических заболеваний благодаря высокой чувствительности и специфичности [59,60,74,88,95].

В настоящее время продолжается поиск маркеров системного склероза, позволяющих дифференцировать его с другими диффузными болезнями соединительной ткани, ревматоидным артритом, псевдосклеродермическими и паранеопластическими синдромами, а также прогнозировать клиническую форму и течение заболевания. В этом свете представляют интерес результаты исследования роли активных форм кислорода в патогенезе аутоиммунных заболеваний. Предполагается, что основное значение свободных радикалов при данной патологии связано с их способностью повреждать белки, липиды, ДНК, придавая им свойства аутоантигенов и провоцируя выработку антител.

Достигается это значительным усилением выработки активных форм кислорода (перекись водорода, гидроксильный радикал, синглетный кислород и др.), которые приводят к деполимеризации гиалуроновой кислоты, окисляют белки, вызывают перекисное окисление липидов, стимулируют высвобождение протеолитических ферментов и вазоактивных аминов. Считают, что именно активные формы кислорода (АФК) ответственны за процессы инактивирования и трансформации ферментов, угнетения функциональной активности иммунокомпетентных клеток [37,38,57,158,188].

Естественным препятствием патологическому воздействию АФК . на собственные ткани является мощная антиоксидантная система организма (АОС), включающая в себя ферментные и неферментные звенья. Основными энзимными компонентами АОС считают глутатионпероксидазу, супероксиддисмутазу, глутатионредуктазу, каталазу и церулоплазмин. Они способны нейтрализовать высокоактивные супероксидные анионы, перекись водорода, гидроперекиси жирных кислот, предотвращая накопление особо токсичных вторичных продуктов перекисного окисления липидов [37,38,88,112,124,134,148,158].

В клинической практике использование прямых определений АФК, гидроперекисей и других продуктов свободнорадикальных реакций в биологических жидкостях затруднено из-за технических сложностей. Однако об интенсивности свободнорадикальных процессов можно судить по состоянию и напряженности реакций антиоксидантнои защиты. Согласно данным ряда авторов, при ревматической патологии наблюдается накопление вторичных токсических продуктов свободнорадикальных реакций вследствие дисбаланса между продукцией и утилизацией АФК. В качестве одной из причин функциональной недостаточности энзимов-антиоксидантов при аутоиммунных заболеваниях считают образование антител к ним [12,37,38,40,74,88,95].

Из всей группы ферментов АОС наименее изученным объектом иммунного ответа при ССД является глутатионпероксидаза (111). В связи с этим представляется актуальным исследовать закономерности антителообразования к глутатионпероксидазе при системной склеродермии, используя иммобилизированную форму фермента. Высокая чувствительность модифицированной методики ИФА дает возможность усовершенствовать способы диагностики системного склероза, выяснить отдельные механизмы патогенеза данного заболевания и обозначить перспективы патогенетической терапии.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ Целью настоящего исследования являлось усовершенствование иммунологической диагностики и оценки эффективности лечения системной склеродермии с помощью иммобилизированной формы глутатионпероксидазы.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:
1.Получить иммобилизированную форму глутатионпероксидазы, изучить ее физико-химические свойства;
2.Адаптировать иммуноферментный метод анализа с использованием иммобилизированной глутатионпероксидазы к изучению образования антител к этому ферменту;
3.Изучить активность глутатионпероксидазы и содержание антител к этому ферменту у больных системной склеродермией и здоровых лиц. Исследовать данные показатели и корреляционные связи между ними у больных ССД в зависимости от активности, стадии, длительности, характера течения заболевания и висцеральных поражений;
4.Изучить динамику антителообразования к глутатионпероксидазе в процессе стационарного лечения.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА Впервые для диагностики ССД созданы и применены в варианте иммуноферментного метода анализа иммобилизированные препараты глутатионпероксидазы. В ходе работы в сыворотках крови больных ССД обнаружены антитела к глутатионпероксидазе. Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных антител в сыворотке крове здоровых лиц. Выявлена достоверная корреляция между содержанием антител к ГП и активностью патологического процесса. Установлено, что поражение сердечно-сосудистой системы и легких при ССД сопровождается максимальными значениями исследуемых антител. Выявлены обратные корреляционные связи между активностью ГП и антителами к ней. Определена способность исследованных показателей к изменению под влиянием проводимой терапии, что обеспечивает возможность оценки ее эффективности.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к ГП на основе иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами. Выявление антител к ГП в предложенной методике ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста для диагностики ССД, оценки активности патологического процесса и прогнозирования клинического варианта заболевания. Обнаружение антител к ГП на начальных сроках заболевания позволяет использовать их определение для ранней диагностики ССД. Динамика изученных показателей дает возможность судить об эффективности проводимой терапии.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ На защиту выносится положение о возможности определения антител к ГП с помощью методов иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами у больных ССД. Исследование антител к ГП может быть использовано в качестве дополнительных тестов для диагностики ССД, выделения клинических вариантов заболевания и уточнения степени активности патологического процесса. Динамика этих показателей может служить для оценки эффективности проводимой терапии.

ПУБЛИКАЦИИ Основные положения диссертации изложены в 6 печатных работах, из которых 4 - в центральной и 2 - в местной печати. Материалы диссертации были представлены на ежегодной научной конференции студентов и молодых ученых ВолГМУ (2008 г.), II Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения - 2007» (Санкт-Петербург, 2007 г.), XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008 г.).

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ Методы определения антител к ГП с помощью иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в МУЗ ГКБ №25 г.Волгограда.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, части I — обзора литературы, в которой изложены современные аспекты иммунопатогенеза системной склеродермии, участии в ее развитии активных форм кислорода и антиоксидантной системы; части II — собственных исследований, состоящей из 6 глав, содержащих клиническую характеристику больных, методики исследования, полученные результаты, их обсуждение, выводы, практические рекомендации и приложения. Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 7 рисунками, приведено 2 выписки из историй болезни.

Указатель литературы содержит 253 источника, в том числе 95 - отечественных и 158 - зарубежных.


© Научная электронная библиотека «Веда», 2003-2013.
info@lib.ua-ru.net