Электронная библиотека Веда
Цели библиотеки
Скачать бесплатно
Доставка литературы
Доставка диссертаций
Размещение литературы
Контактные данные
Я ищу:
Библиотечный каталог российских и украинских диссертаций

Вы находитесь:
Диссертационные работы России
Медицинские науки
Медицинская биохимия

Диссертационная работа:

Головков Дмитрий Анатольевичд-р. Клиническая значимость ключевых маркеров ангиогенеза, апоптоза и системы активации плазминогена в сыворотке крови и опухоли больных колоректальным раком : диссертация ... доктора медицинских наук : 14.00.46 / Головков Дмитрий Анатольевичд-р; [Место защиты: ГОУДПО "Российская медицинская академия последипломного образования"].- Москва, 2009.- 150 с.: ил.

смотреть содержание
смотреть введение
Содержание к работе:

Стр.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 5

ВВЕДЕНИЕ 6

ГЛАВА I. Внеклеточные протеолитические системы и компоненты
внеклеточного матрикса в опухолях человека. Клиническая значимость и
перспективы использования при раке толстой кишки (обзор
литературы) 20

1.1. Внеклеточный матрикс и матрикс-деградирующие ферменты в
опухолях человека 20

1.1.1. Роль металлопротеиназной системы в опухолевой прогрессии:
ММР и TIMP при раке толстой кишки 22

1.1.2. Роль плазминогенной системы в опухолевой прогрессии: иРА,
tPA и PAI-I при раке толстой кишки 29

1.2. Влияние активности внеклеточных протеолитических ферментов и
их ингибиторов на процессы ангиогенеза и апоптоза в опухолях больных
раком толстой кишки 30

1.2.1. Взаимосвязь белков семейства VEGF и маркеров протеолиза при
прогрессии опухоли 31

1.2.2. Взаимосвязь системы Fas/FasL, маркеров ангиогенеза и
протеолиза при прогрессии опухоли 37

1.3. Внеклеточные протеолитические системы и метастатическая
активность рака толстой кишки 41

1.4. Компоненты базальных мембран при раке толстой кишки и их
структурные нарушения под действием протеолитических ферментов 44

1.5. Прогностическая и предсказательная значимость содержания
ферментов внеклеточного матрикса и компонентов базальных мембран в
раке толстой кишки 48

з
ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 55

  1. Характеристика больных раком толстой кишки 55

  2. Методы определения иммуногистохимических маркеров 62

  3. Методы определения биохимических маркеров 64

  4. Статистический анализ результатов исследования 67

ГЛАВА III. Иммуногистохимические и биохимические маркеры в опухоли и
сыворотке крови больных раком толстой кишки (результаты собственных
исследований) 69

  1. Содержание ММР-9 в опухоли больных раком толстой кишки... .69

  2. Содержание коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки 72

  3. Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки 74

3.4. Содержание sFas в сыворотке крови больных раком толстой

кишки 82

ГЛАВА IV. Связь содержания компонентов системы активации
плазминогена в опухолях больных раком толстой кишки с экспрессией
иммуногистохимических и биохимических маркеров 90

4.1. Содержание uPA, tPA и PAI-1 в ткани опухоли и неизмененной
слизистой оболочке толстой кишки 90

4.2. Содержание компонентов системы активации плазминогена в
опухоли больных раком толстой кишки с учетом клинико-морфологических
признаков заболевания 92

  1. Связь содержания компонентов системы активации плазминогена с экспрессией ММР-9 и коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки 99

  2. Связь содержания компонентов системы активации плазминогена в опухоли уровнями белков VEGF и sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки 100

4 ГЛАВА 5. Связь отдаленных результатов лечения с содержанием иммуногистохимических и биохимических маркеров в опухоли и сыворотке

крови больных раком толстой кишки 102

ГЛАВА 6. Тканевые и сывороточные биохимические и иммуногистохимические маркеры у больных раком толстой кишки и риск

развития метастазов в печени 115

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 127

ВЫВОДЫ 143

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 146

ЛИТЕРАТУРА 147

Список условных сокращений

ИЛ - интерлейкин

ИФА - иммуноферментный анализ

ИГХ - иммуногистохимическое исследование

КРР - колоректальный рак

НК - натуральные киллеры

МА - моноклональные агонистические антитела

ПКГ - программированная клеточная гибель

РТК - рак толстой кишки

ЦТЛ - цитотоксические лимфоциты

VEGF - фактор роста эндотелия сосудов

FasL - Fas-лиганд

sFas - растворимый Fas

uPA - активатор плазминогена урокиназного типа

tPA - активатор плазминогена тканевого типа

PAI-1 - ингибитор активатора плазминогена 1 типа

ММР-9 - матриксная металлопротеиназа 9

TIMP - тканевой ингибитор металлопротеиназ

Введение к работе:

В последние годы в большинстве стран мира, в том числе и в нашей стране, наблюдается рост заболеваемости колоректальным раком (Н.Н.Трапезников и соавт., 2001; В.В.Маршак, 2004; Г.И.Воробьев и соавт., 2005; Hawk Е.Т. et al., 2002; Levin В. et al., 2005). Ежегодно в мире регистрируется около 1 млн. новых случаев рака прямой и ободочной кишки (3-й по частоте показатель заболеваемости среди онкологических болезней), а умирает почти 500 тыс. человек (4-е место по показателю смертности) (Engstrom P.F., 2000; Parkin D.M. et al., 1999; В.В.Мартынюк, 2004; Н.Н.Симонов и соавт., 2000,2004; Н.Н.Трапезников и соавт., 2000).

По прогнозу ожидается, что в XXI веке в России рак данной локализации займет первое место в структуре онкологической заболеваемости (Н.Н.Симонов и соавт., 2000; В.И.Чиссов и соавт., 2000; Н.А. Яицкий и соавт., 2004; М.И.Давыдов и соавт., 2004). В России ежегодно колоректальным раком заболевают 50 тыс. человек (3-е место у мужчин после рака легких и желудка и 2-е место у женщин после рака молочной железы) при ежегодной смертности, равной 35 тыс. В ' Москве колоректальный рак вышел на 1-е место среди причин смерти от онкологических заболеваний. При этом в России рак ободочной кишки выявляется в 1,2 раза чаще, чем прямой (Н.Н.Трапезников и соавт., 2001). Соотношение рака ободочной кишки к' раку прямой кишки в развитых странах составляет примерно 2:1 (Ю.М.Тимофеев, 2004). Колоректальный рак в экономически развитых странах занимает 3-е место по частоте заболеваемости и второе место среди причин смерти у онкологических больных.

Отдаленные результаты лечения больных колоректальным раком напрямую зависят от ряда факторов, включающих стадию заболевания, степень дифференцировки опухоли, ее метастатический потенциал, а также от квалификации врача и на сегодняшний день их нельзя считать

7 удовлетворительными, так как показатели 5-летней выживаемости после радикальных операций по поводу колоректального рака не превышают 50-60% (В.И. Кныш и соавт., 1994; Nordlinder В. et al., 1994; Ю.А. Барсуков и соавт., 2006). Так, например, общая 5-летняя выживаемость в Европе составляет 40%, а среди больных с запущенной формой заболевания — не превышает 5%. Все это можно объяснить тем, что только у 20,5% больных раком ободочной кишки и у 31,1% — прямой кишки при первом обращении выявляют I-II стадии заболевания (Н.А.Яицкий и соавт., 2004; Г.И.Воробьев и соавт., 2005). У остальных выявляются III-IV стадии (Fujita S. et al., 2000; Verwaal VJ. et al., 2005). В России около 70% больных имеют III—IV стадию заболевания на этапе первичной диагностики (М.И.Давыдов и соавт., 2002; В.В.Пророков и соавт., 2004). При этом около 25% больных уже имеют метастазы в момент установления первичного диагноза рака толстой кишки (Н.И.Переводчикова, 2004; Ю.И.Патютко и соавт., 2006). Следовательно, приходится констатировать, что эти факторы не обеспечивают пока необходимого уровня ранней диагностики и должных результатов лечения (А.М.Ганичкин, 1975; Б.А.Бердов и соавт., 1986; В.Ф.Левшин и соавт., 1990; В.Л.Ривкин и соавт., 2001; Ragazzi R. et al., 2001).

Метастазы являются основным фактором, отягощающим прогноз колоректального рака. Несмотря на быстрое развитие методов диагностики, хирургического и комбинированного лечения заболевания, процент метастазов и рецидивов колоректального рака остается высоким (Н.Н.Трапезников и соавт., 2001; Е.Н.Имянитов, 2005). По данным отечественных и зарубежных авторов к моменту постановки диагноза около 25% больных уже имеют метастазы, а примерно у 50% метастазы разовьются в дальнейшем (М.И.Давыдов и соавт., 2005; Ю.А.Барсуков и соавт., 2006; Greenlee R.T. et al., 2000; Engstrom P.F., 2000). Метастазы в печени выявляются у 55%о больных, подвергшихся радикальному удалению первичной опухоли (Ю.И.Патютко и соавт., 2001). В этой связи, поиск дополнительных критериев, позволяющих оценить вероятность развития

8 метастазов и выделить группу больных с повышенным риском их развития, остается актуальной задачей (К.П.Хансон, 2005).

В настоящее время проводится активный поиск дополнительных маркеров, которые предсказывают высокий риск опухолевой прогрессии (А.С.Белохвостов и соавт., 2003; А.А.Иванов и соавт., 2005; В.И.Киселев и соавт., 2005; Gershtein E.S. et al., 2008; Suwa Т. et al., 2008). Для улучшения отдаленных результатов лечения необходима разработка дополнительных методов оценки метастатического потенциала раковых клеток и выявление среди больных раком толстой кишки групп риска, требующих адъювантной терапии после радикального хирургического вмешательства (А.П.Колесник и соавт., 2006). Правильная оценка биологических факторов, коррелирующих с прогнозом заболевания и продолжительностью жизни пациентов, важна не только при локализованных формах колоректального рака, но и после выявления отдаленных метастазов опухоли (Aldrighetti L. et al., 2005; Ambiru S.etal., 1999).

В настоящее время бурно развивается направление молекулярной диагностики и оценки прогноза злокачественных опухолей, а исследование особенностей биологического поведения опухоли является сегодня одной из наиболее актуальных областей онкологии (К.М.Пожарисский и соавт., 2000, 2004; В.В.Делекторская и соавт., 2003; А.А.Новик и соавт., 2004; Г.А.Франк и соавт., 2005; Von Kleist S., 2008). Эти методы делают диагностику колоректального рака более ранней и точной, и, что самое главное, позволяют назначить дифференцированное лечение (В.А.Исаков и соавт., 2002; Baldus S.E., 2003; Bendardaf R. et al., 2004; Ahmed F.E., 2005). Интенсивно разрабатываются и внедряются в клиническую практику дополнительные биохимические, иммуногистохимические и молекулярно-биологические методы исследования, которые характеризуют степень агрессивности опухолевого процесса и, кроме того, позволяют индивидуализировать прогноз клинического течения и чувствительность опухоли к проводимой терапии (О.В.Голубченко, 2003; А.Б.Моисеенко, 2003;

9 А.А.Новик и соавт., 2004; К.М.Пожарисский и соавт., 2004; Spano J.P. et al., 2005; Issa J.-P., 2008). Вместе с тем остается окончательно не решенной проблема прогнозирования течения заболевания у больных колоректальным раком после радикального лечения.

Основой для выделения клинически значимых молекулярных факторов послужило открытие наблюдаемых в процессе развития и прогрессии опухоли структурных и функциональных изменений онкогенов и генов-супрессоров (Б.П.Копнин, 2000; Vogelstein В. et al.,1988; Pasche В. et al., 2003). Особенности экспрессии кодируемых этими генами белков могут выявляться с помощью биохимического иммуноферментного определения данных показателей в сыворотке крови и в ткани опухоли больных колоректальным раком (Kahlenberg M.S. et al., 2003; Davies R.J. et al., 2005). Кроме того, расширяются возможности иммуногистохимического выявления в клетках колоректального рака и в структурах внеклеточного матрикса особенностей экспрессии молекулярных маркеров, отражающих специфику биологической активности опухоли (В.В.Делекторская и соавт., 2008; Ahmed F.E. et al., 2007; Muller W. et al., 1998; Sarris M., Lee C.S., 2001).

На сегодняшний день, несмотря на многообразие клинических и молекулярных маркеров, свидетельствующих о прогрессировании опухолевого процесса, представляется целесообразным дальнейшее изучение клинической значимости существующих и поиск новых маркеров, имеющих прогностическое значение при колоректальном раке (Р.И.Якубовская, 2000; Н.А.Корсакова и соавт., 2003; Yamada Н. et al., 2001; Д.В.Залетаев и соавт., 2004; Ф.Л.Киселев, 2005).

В этом плане актуальным является изучение процессов перестройки внеклеточного матрикса в опухоли, которое осуществляется факторами роста и системой протеаз (Forte A. et al., 2002; Neal СР. et al., 2006; Gershtein E.S. et al., 2008). Среди опухолеассоциированных протеолитических ферментов ведущую роль играет система активаторов плазминогена, представленная двумя протеазами - тканевым и урокиназным активаторами плазминогена

10 (uPA и tPA), а также металлопротеиназная система, состоящая из 25 представителей (Н.Е.Кушлинский и соавт., 2008; Berney C.R. et al., 1998,1999). Ключевую роль в семействе металлопротеиназ играют ММР-2 и ММР-9, функция которых связана с гидролизом коллагена базальных мембран (Е.С.Герштейн и соавт., 2008; Brabletz Т. et al., 2000; Boedefeld W.M. et al., 2003; Chen J.Q. et al., 2004; Duan G.J. et al., 2004). uPA и tPA превращают неактивный зимоген плазминоген в плазмин, расщепляющий фибрин и белки внеклеточного матрикса, а также активирующий ММР-2 и ММР-9. Эти процессы способствуют разрушению базальных мембран и облегчают инвазию опухолевых клеток. Следует отметить, что все указанные протеазы расщепляют компоненты внеклеточного матрикса, но при этом важную роль в опухолевой прогрессии играют и их эндогенные ингибиторы (TIMP и PAI), причем отдельные из них могут способствовать протеолитическому действию ферментов (М.А.Пальцев и соавт., 2003; Gershtein Е. et al., 2007). ММР, сериновые протеазы (uPA, tPA) не только облегчают опухолевый рост, раковую инвазию и метастазирование, но и могут являться мишенью для противоопухолевой терапии и лечения метастазов (Е.С.Герштейн и соавт., 2007; Mysliwill A.G., Ornstein D.L., 2002; Waas Е.Т. et al., 2002; Gontero P. et al., 2004; Rosen L.S., 2005; Wadler S. et al., 2007).

Основные белки базальных мембран (коллаген IV типа и ламинин) являются не только структурным барьером для метастатического распространения раковых клеток, но и важной функциональной единицей, участвующей в опухолевой прогрессии (Galbavy S. et al., 2002).

Процесс опухолевой прогрессии требует взаимодействия многочисленных молекулярных факторов, при этом деградирующие матрикс протеиназы не только ремоделируют архитектуру внеклеточного матрикса, но и воздействуют на различные пути передачи сигнала в клетке, усиливают ангиогенез и способствует уклонению от программы апоптоза в опухоли

(М.А.Пальцев и соавт., 2003; В.И.Киселев и соавт., 2005; Г.И.Абелев и соавт., 2008; Mignatti P. et al., 1996).

Так, известно, что ключевым проангиогенным фактором является VEGF — гликопротеин, стимулирующий пролиферацию эндотелиальных клеток. Этот фактор усиленно продуцируется клетками ряда новообразований, способствуя неоваскуляризации опухоли, усилению проницаемости сосудов, и активации лимфогенного метастазирования (С.В.Луценко и соавт., 2004; М. А.Пальцев, 2004; Не Y. et al., 2005; Gershtein Е. S. et al., 2006; Shin J. E. et al., 2007).

Апоптоз или его отдельные элементы выполняют важные физиологические функции, при этом преодоление апоптоза является необходимым условием успешного развития опухоли (А.Ю.Барышников и соавт., 1996, 2002; А.А.Фильченков, 1998,2003; Н.Н.Белушкина, 2003, 2004; С.Г.Аббасова и соавт., 2007; Е.Ф.Лушников и соавт., 2001; Grell V. et al., 1994). Один из механизмов, регулирующих эти процессы в опухоли, связан с активностью апоптоз-специфических белков системы Fas/FasL (Н.Н.Белушкина и соавт., 2004; Bennett M.W. et al., 2001; O'Connell J. et al. 2000; Zhu Q. et al., 2005; Song E. et al., 2001).

Относительно недавно получены первые клинические исследования по неоангиогенезу и Fas-зависимому апоптозу при солидных опухолях, в том числе и колоректальном раке (Н.Е.Кушлинский и соавт., 2001; С.Г.Аббасова и соавт., 2007). Показано, что повышенный уровень продукции ключевого активатора ангиогенеза - VEGF (С.В.Луценко и соавт., 2004; Е.В.Черноглазова, -2004; Folkman J., 1992) и ингибитора апоптоза -растворимого Fas-антигена (sFas) у больных некоторыми злокачественными новообразованиями может свидетельствовать о высоком «метастатическом потенциале» опухоли, что является неблагоприятным прогностическим фактором (В.С.Новиков, 1996; С.Р.Уманский, 1996; А.А.Фильченков и соавт., 1999; С.М.Киселев и соавт., 2005). Однако эти данные основаны пока на незначительном числе наблюдений. Кроме того, не изучали одновременно

12 факторы ангиогенеза и апоптоза с использованием малоинвазивных биохимических методов исследования в сыворотке крови, что также затрудняет обсуждение представленных в литературе результатов.

Таким образом, к формированию метастатического фенотипа клеток рака толстой кишки приводит изменение активности таких молекулярных факторов как ММР (ММР-2 и ММР-9), ключевых компонентов системы активации плазминогена (uPA, tPA, PAI-1), основных компонентов базальных мембран (коллаген IV типа, ламинин), проангиогенных факторов (VEGF), маркеров апоптоза (sFas).

Влияние молекулярных факторов при раке толстой кишки на клиническое течение и прогноз заболевания изучено недостаточно, несмотря на то, что накапливается все больше данных о нарушениях их нормальной экспрессии и функционирования. Многие вопросы, касающиеся корреляции клинико-морфологических характеристик опухоли и изменений биологических показателей, происходящих в процессе прогрессирования рака толстой кишки, нуждаются в уточнении. Этим- определяется актуальность изучения молекулярных критериев, прогнозирующих агрессивность течения колоректального рака.

Цель работы.

Изучение особенностей экспрессии молекулярно-биологических маркеров внеклеточного матрикса, ангиогенеза, апоптоза в опухоли, сыворотке крови больных раком толстой кишки и роли комплекса этих факторов в оценке прогноза заболевания.

Задачи исследования.

1. Изучить биохимические и иммуногистохимические особенности экспрессии ММР-9 в первичных опухолях больных раком толстой кишки и в прилежащей к опухоли непораженной слизистой оболочке.

2. Исследовать особенности экспрессии структурных компонентов
базальных мембран (коллагена IV типа) в злокачественных опухолях
толстой кишки.

3. Провести сравнительный анализ особенностей экспрессии ферментов
внеклеточного матрикса и компонентов базальных мембран и выявить их
взаимосвязь с основными клиническими\ и морфологическими параметрами
заболевания.

4. Провести иммуноферментное определение молекулярно-
биологических маркеров неоангиогенеза (VEGF) и апоптоза (sFas) в
сыворотке крови больных раком толстой: кишки и изучить корреляцию
биохимических показателей с основными клинико-морфологическими
параметрами заболевания.

  1. Провести»; иммуноферментное определение- содержания компонентов системы активации; плазминогена (uPA, tPA, PAI-1) в* опухоли больных колоректальнымраком и изучить корреляцию биохимических показателей с основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания.

  2. Определить прогностическую значимость биохимических и иммуногистохимических особенностей экспрессии белковых маркеров у. больных раком толстой кишки.

. 1. Провести; статистическую обработку данных и на основании многофакторного анализа результатов исследования выделить значимые и независимые прогностические показатели призраке толстой*кишки:

Научная новизна;

Проведен комплексный- клинический;. морфологический и биохимический анализ современных молекулярно-биологйческих маркеров у больных раком толстой кишки, таких как протелитические ферменты и компоненты внеклеточного матрикса, факторы неоангиогенеза и апоптоза.

14 Обнаружена повышенная экспрессия ММР-9 в ткани опухоли больных раком толстой кишки у 48,7% пациентов. При этом частота выявления высокой экспрессии белка достоверно повышалась до 80% у больных при IVb стадии, при низкой степени дифференцировки опухоли (80%) и при наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах (82,4%).

У 57,2% больных раком толстой кишки выявлена низкая экспрессия коллагена IV типа в опухоли, причем частота выявления низкой экспрессии белка достоверно повышалась у пациентов в IVb стадии (85%), при низкой степени дифференцировки опухоли (76%), при выраженной глубине инвазии в стенку кишки (75%>), а также при наличии инвазии клеток рака в кровеносные сосуды (86,3%).

Обнаружено, что уровень ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки был достоверно выше по сравнению с контролем. Причем, достоверно более высокое содержание VEGF выявлено в сыворотке крови больных при IV стадии колоректального рака, тогда как концентрация VEGF у больных раком толстой кишки при I и Иа стадиях опухоли не отличалась от содержания маркера у практически здоровых людей. Содержание маркера достоверно повышалось при увеличении глубины инвазии опухоли и при наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах.

Содержание VEGF при низкой степени дифференцировки колоректального рака было достоверно выше, чем при высокой. Одновременно с увеличением концентрации VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки обнаружено достоверное повышение в опухоли уровня неблагоприятно высокой экспрессии ММР-9 и низкая экспрессия коллагена IV типа.

Впервые обнаружено, что sFas выявлялся в 2 раза чаще (57,8%) у больных колоректальным раком по сравнению с контролем, а его содержание

15 в группе практически здоровых людей было ниже, чем у больных. При этом уровни sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки зависели от стадии заболевания, хотя при I стадии не отличались от содержания маркера у практически здоровых людей. Достоверно выше было содержание sFas при значительной глубине инвазии, при наличии инвазии в кровеносные сосуды, при неблагоприятных уровнях экспрессии белков ММР-9 и коллагена IV типа.

Обнаружено, что содержание uPA и tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой. При этом уровни uPA и tPA в ткани первичной опухоли зависели от ряда клинико-морфологических характеристик опухоли.

Полученные данные свидетельствуют о том, что новый подход к прогнозированию клинического течения колоректального рака основан на использовании комплексного определения согласованных изменений экспрессии изученных молекулярно-биологических маркеров в опухоли и сыворотке крови больных для определения влияния данных показателей на инвазивный потенциал опухоли, ее метастатический потенциал и выживаемость пациентов. На основании исследования молекулярных характеристик колоректального рака разработаны критерии, позволяющие идентифицировать случаи с повышенным риском развития отдаленных метастазов.

Впервые при раке толстой кишки изучена корреляция между экспрессией белков базальных мембран, факторов неоангиогенез, апоптоза, активностью матриксных металлопротеиназ и компонентов системы активации плазминогена. Изучение особенностей экспрессии белковых маркеров в опухоли и сыворотке крови больных колоректальным раком позволило уточнить некоторые патогенетические механизмы прогрессирования опухоли.

Практическая значимость.

На основе анализа некоторых молекулярно-биологических характеристик опухоли определены критерии для выявления наиболее прогностически неблагоприятных случаев и предрасположенности больных колоректальным раком к развитию метастазов. Так, показатели общей выживаемости больных колоректальным раком при высоком уровне экспрессии ММР-9 в первичной опухоли в 3 раза достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка, а 5-летняя безрецидивная выживаемость пациентов ниже в 1,5 раза. Показатели общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки зависели от уровня исходной концентрации ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови и при высоких его значениях (от 800 пг/мл и более), они были достоверно ниже, чем при значении VEGF менее 400 пг/мл. При этом, высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли больных колоректальным раком был связан с повышенными исходными уровнями VEGF в сыворотке крови. Общая 5-летняя выживаемость больных колоректальным раком при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была достоверно ниже. Кроме того, обнаружено, что безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки достоверно различалась между больными по пороговому уровню 3 нг/мг белка для иРА, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг белка для PAI-1. Многофакторный анализ выявил наиболее неблагоприятные сочетания маркеров при оценке общего прогноза рака толстой кишки: ММР-9-коллаген ГУ типа, MMP-9-uPA, MMP-9-PAI-1, коллаген IV типа-РА1-1 и при прогнозе отдаленных метастазов MMP-9-sFas.

Таким образом, настоящее исследование представляет практический интерес для оценки послеоперационного прогноза больных раком толстой кишки и выделения групп повышенного риска развития метастазов и

17 рецидивов, требующих дополнительного лечения или более тщательного динамического наблюдения.

Апробация работы.

Основные положения работы были доложены и обсуждены на: Российской научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии в онкологии» (Барнаул, 7-8 июня 2005г.); VI Всероссийском съезде онкологов (Ростов-на-Дону, 9-14 октября 2005г.); II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 20-21 октября 2005г.); на XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 3-7 апреля 2006г.); Международной научно-практической конференции «Ведущий многопрофильный госпиталь страны: основные функции, достижения и направления развития» (Москва, 1 -2 июня 2006г.); Российской научно-практической конференции с международным участием: «Современные методы лечения онкологических больных: достижения и неудачи» (Барнаул, 4-5 июля 2006г.); IV съезде онкологов и радиологов СНГ (Баку, 28 сентября - 1 октября 2006г.); X Российском онкологическом конгрессе (Москва, 21-23 ноября 2006г.); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 16-20 апреля 2007г.); XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 14-18 апреля 2008г.).

Апробация диссертации проведена на совместной научной конференции с участием сотрудников кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики Московского государственного медико-стоматологического университета, лаборатории клинической биохимии, хирургического отделения проктологии, отдела патологической анатомии опухолей человека НИИ клинической онкологии ГУ Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН 12 июня 2008г.

18 Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе в изданиях, рекомендуемых ВАК, - 7 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 173 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов w практических рекомендаций. Текст иллюстрирован 58 таблицами и 23 рисунками. Указатель литературы содержит 74 работы отечественных авторов и 186 — зарубежных.

Положения, выносимые на защиту:

1! Наиболее- высокие уровни> экспрессии ММР-9' выявлены в опухоли у преобладающего ^ большинства больных раком толстой* кишюг при поздних стадиях заболевания; при низкой- степени' дифференцировки-опухоли, а также при наличии,инвазии карциномы в кровеносных сосудах. При этом, общая 5-летняя выживаемость больных раком-толстой'кишки при высоком уровне экспрессии ММР-9 достоверно ниже, чемшри низкой экспрессии белка.

  1. Низкий-уровень экспрессии коллагена IV типа достоверно чаще выявляли в опухолях у больных колоректальным раком, при распространенном; процессе, при низкой степени* дифференцировки опухоли- прш выраженной глубине инвазии опухоли- в« стенку кишки, а также при наличии инвазии опухоли і в кровеносных сосудах. Показатели? общей 5-летней выживаемости больных с низкой экспрессией, коллагена' IV типа* в опухоли были достоверно ниже, чем при высокой*экспрессии;маркера.

  2. Исходная концентрация'ключевого активатора неоангиогенеза'УІЮР в^

19 сыворотке крови больных раком толстой кишки была достоверно выше по сравнению с практически здоровыми людьми. При этом, уровень маркера достоверно повышался в сыворотке крови больных с увеличением глубины инвазии опухоли в стенку кишки, при прорастании опухоли в кровеносные сосуды, при низкой степени дифференцировки опухоли.

  1. Самые низкие показатели общей 5-летней выживаемости отмечены среди больных раком толстой кишки с высокими уровнями VEGF (от 800 пг/мл и более). При этом высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли был связан с повышенными исходными показателями VEGF в сыворотке крови, тогда как при низких исходных значениях VEGF чаще выявляли высокую экспрессию коллагена IV типа'в первичной опухоли.

  2. Почти в 2 раза чаще sFas выявляли в сыворотке крови больных колоректальным раком, а его уровни были достоверно выше по сравнению с практически здоровыми людьми; при этом, общая 5-летняя выживаемость больных раком толстой кишки при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была достоверно ниже.

  3. Содержание uPA и tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой и зависело от основных клинико-морфологических характеристик заболевания, а именно, распространенности опухолевого процесса, степени дифференцировки опухоли, глубины прорастания в стенку кишки и кровеносные сосуды.

  4. Безрецидивная выживаемость больных колоректальным раком достоверно различалась по порогу уровню 3 нг/мг белка для uPA, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг белка для PAI-1.

  5. Выявлены наиболее неблагоприятные сочетания маркеров при оценке общего прогноза у больных раком толстой кишки: ММР-9/коллаген IV типа, MMP-9/uPA, MMP-9/PAI-1, коллаген IV типа/РАЫ и при прогнозе отдаленных метастазов - MMP-9/sFas.


© Научная электронная библиотека «Веда», 2003-2013.
info@lib.ua-ru.net